A. 含淀粉的试样:称取混合均匀的固体试样约1.5g,液体试样约5g(精确到0.1mg)于毛氏抽脂瓶中,加入约0.1g 淀粉酶(酶活力1.5U/mg),混合均匀后,加入8mL~10mL45℃±2℃的水,摇匀。盖上瓶塞置于55℃±2℃水浴中2 h,每隔10min 摇混一次。加入两滴约0.1 mol/L 的碘溶液,检验淀粉是否水解完全。若无蓝色出现,则水解完全,否则将毛氏抽脂瓶重新置于水浴中,直至蓝色消失,取出冷却至室温。
B. 不含淀粉的试样:称取混合均匀的固体试样约1.5g,液体试样约10g(精确到0.1 mg)于毛氏抽脂瓶中,加入10mL45℃±2℃的水,将试样洗入毛氏抽脂瓶的小球中,充分混合,直到试样完全散开,冷却至室温。
C. 脂肪的提取:向毛氏抽脂瓶中加入3.0 mL 氨水,混匀。置于60℃±2℃水浴中15 min~20min,冷却至室温。加入10mL乙醇和1滴刚果红溶液,混匀。再加入25mL乙mi,塞上软木塞,放到毛氏抽脂瓶)摇混器上震荡1min,也可采用手动振摇方式,再加入25mL石油醚,震荡1 min,不低于4000转/分钟离心分层。倾出上清液于脂肪收集瓶中,为第一次提取。在剩余试样液中再加入5mL 乙醇,25mL乙mi,25mL石油醚按上述操作步骤进行第二次提取。用离心机离心分层后倾出上清液与第一次的上清液合并。将脂肪收集瓶置于旋转蒸发器上,在60℃±2℃通入氮气条件下旋转蒸发除去溶剂,保留残渣,即为脂肪。
D. 脂肪酸甲酯的制备:将上述脂肪用正己烷溶解并定容至10.0mL,取出3.0mL 于10mL具塞试管中,加入0.3mL 氢氧化钾-甲醇溶液。盖紧瓶盖,涡旋振荡器上剧烈振摇2 min,4000转/分钟离心5min 后将上清液转入气相色谱试样瓶中,此为试样测定液。